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技術(shù)(Technology)
FluorCam封閉式GFP/Chl.熒光成像系統(tǒng)

時(shí)間:2020-02-17

作者:易科泰

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簡介:

  FluorCam封閉式GFP/Chl.熒光成像系統(tǒng)可以為一系列應(yīng)用到綠色熒光蛋白的分子和細(xì)胞生物學(xué)研究提供服務(wù)。在封閉式熒光成像系統(tǒng)上安裝了完全由軟件控制和電動(dòng)驅(qū)動(dòng)的濾波輪,以及一系列的濾光片組,可以對(duì)GFP、EGFP、wtGFP、YFP、BFP或者其它波段熒光蛋白和熒光素進(jìn)行檢測(cè)和成像。

 

 

  FluorCam封閉式GFP/Chl.熒光成像系統(tǒng)也可用于檢測(cè)植物發(fā)出葉綠素?zé)晒獾膭?dòng)態(tài)變化和空間分布,測(cè)量Kautsky效應(yīng)過程、熒光淬滅及其它瞬時(shí)熒光過程(瞬變)并提供2維熒光圖像。專門設(shè)計(jì)的硬件配置使得本系統(tǒng)能夠自動(dòng)轉(zhuǎn)換成熒光蛋白、熒光素成像或葉綠素?zé)晒鈾z測(cè)成像。該系統(tǒng)高度集成,并且可以進(jìn)行樣品的暗適應(yīng)。

 

 

應(yīng)用領(lǐng)域:

  • 熒光蛋白與熒光素的熒光檢測(cè)
  • 基因轉(zhuǎn)移和生物傳感器技術(shù)
  • 轉(zhuǎn)基因植物研究
  • 不同基因型抗性篩選
  • 植物——微生物交互作用研究
  • 植物——原生動(dòng)物交互作用研究
  • 植物光合特性和代謝紊亂篩選
  • 生物和非生物脅迫的檢測(cè)
  • 植物抗脅迫能力或者易感性研究
  • 氣孔非均一性研究
  • 代謝混亂研究
  • 長勢(shì)與產(chǎn)量評(píng)估

 

 

功能特點(diǎn):

  • 操作簡便,測(cè)量樣品高度可調(diào),集成了專用暗適應(yīng)箱,方便被測(cè)植物的暗適應(yīng)處理、操作等
  • 高分辨率CCD,分辨率高達(dá)1392×1040像素,快速精確捕捉葉綠素?zé)晒夂虶FP
  • 可進(jìn)行自動(dòng)重復(fù)成像測(cè)量,可設(shè)置一個(gè)實(shí)驗(yàn)程序(Protocols)自動(dòng)循環(huán)成像測(cè)量,成像測(cè)量數(shù)據(jù)自動(dòng)按時(shí)間日期存入計(jì)算機(jī)(帶時(shí)間戳)
  • 帶有Kautsky誘導(dǎo)效應(yīng)、熒光淬滅分析等各種通用實(shí)驗(yàn)程序(protocols),測(cè)量分析參數(shù)達(dá)50多個(gè)
  • 可選配TetraCam彩色成像模塊,最大成像面積20×25cm,用于葉片或植物形態(tài)測(cè)量分析

 

 

典型樣品:

  • 葉片,莖,種子,根,整株小植物
  • 愈傷組織,培養(yǎng)皿中的小苗
  • 果實(shí)和花朵
  • 藍(lán)細(xì)菌,綠藻,細(xì)菌
  • 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物

 

 

技術(shù)參數(shù):

  • 測(cè)量參數(shù):Fo, Fo’, Fs, Fm, Fm’, Fp, FtDn, FtLn, Fv, Fv'/ Fm',F(xiàn)v/ Fm ,Fv',Ft,ΦPSII, NPQ_Dn, NPQ_Ln, Qp_Dn, Qp_Ln, qN, qP,QY, QY_Ln, Rfd, ETR等50多個(gè)葉綠素?zé)晒鈪?shù),每個(gè)參數(shù)均可顯示2維熒光彩色圖像
  • 具備完備的自動(dòng)測(cè)量程序(protocol),可自由對(duì)自動(dòng)測(cè)量程序進(jìn)行編輯

  a) Fv/Fm:測(cè)量參數(shù)包括Fo,F(xiàn)m,F(xiàn)v,QY等

  b) Kautsky誘導(dǎo)效應(yīng):Fo,F(xiàn)p,F(xiàn)v,F(xiàn)t_Lss,QY,Rfd等熒光參數(shù)

  c) 熒光淬滅分析:Fo,F(xiàn)m,F(xiàn)p,F(xiàn)s,F(xiàn)v,QY,ΦII,NPQ,Qp,Rfd,qL等50多個(gè)參數(shù)

  d) 光響應(yīng)曲線LC:Fo,F(xiàn)m,QY,QY_Ln,ETR等熒光參數(shù)

  e) PAR吸收與NDVI(選配)

  f) QA再氧化動(dòng)力學(xué)(選配)

  g) GFP等靜態(tài)熒光成像測(cè)量

  h) OJIP快速熒光動(dòng)力學(xué)分析(選配):Mo(OJIP曲線初始斜率)、OJIP固定面積、Sm(對(duì)關(guān)閉所有光反應(yīng)中心所需能量的量度)、QY、PI等26個(gè)參數(shù)

  • 高分辨率TOMI-2 CCD傳感器

  a) 逐行掃描CCD

  b) 最高圖像分辨率:1360×1024像素

  c) 時(shí)間分辨率:在最高圖像分辨率下可達(dá)每秒20幀

  d) A/D 轉(zhuǎn)換分辨率:16位(65536灰度色階)

  e) 像元尺寸:6.45μm×6.45μm

  f) 運(yùn)行模式:1)動(dòng)態(tài)視頻模式,用于葉綠素?zé)晒鈪?shù)測(cè)量;2)快照模式,用于GFP等熒光蛋白和熒光染料測(cè)量

  g) 通訊模式:千兆以太網(wǎng)

  • 光源板:4塊大型高強(qiáng)度封裝LED光源板,每個(gè)光源板由36顆LED陣列組成,光源板有效面積與成像面積相同13×13cm
  • 測(cè)量光:標(biāo)配617nm紅光,其它波段可選,持續(xù)時(shí)間10μs–100μs可調(diào)
  • 雙色光化光: 2紅光(617nm)+2藍(lán)光(470nm或445nm), Actinic1最大光強(qiáng)300μmol(photons)/m2.s,Actinic2最大光強(qiáng)2000μmol(photons)/m2.s;最大光化學(xué)光可升級(jí)至3000μmol(photons)/m2.s
  • 飽和光閃:最大光強(qiáng)4000μmol(photons)/m2.s,可升級(jí)至6000 μmol(photons)/m2.s
  • 成像面積:13×13cm,可對(duì)植物葉片、植物組織、藻類、苔蘚、地衣、整株植物或多株植物、96孔板、384孔板等進(jìn)行成像分析
  • GFP測(cè)量模塊:7位濾波輪及專用濾波片,用于測(cè)量GFP(綠色熒光蛋白)
  • PAR吸收測(cè)量模塊(選配):遠(yuǎn)紅光735nm(FAR)、紅光650nm雙色LEDs光源板及專用濾波片,用于測(cè)量PAR吸收及NDVI
  • QA在氧化動(dòng)力學(xué)成像分析(選配):可進(jìn)行STF熒光動(dòng)力學(xué)分析測(cè)量,單周轉(zhuǎn)光閃(STF)光強(qiáng)達(dá)120000 μmol(photons)/m2.s in 100μs
  • OJIP快速熒光動(dòng)力學(xué)模塊(選配):時(shí)間分辨率達(dá)1μs,可測(cè)定分析OJIP曲線與二十幾項(xiàng)相關(guān)參數(shù)包括:Fo、Fj、Fi、P或Fm、Vj、Vi、Mo、Area 、Fix Area、Sm 、Ss 、N(QA還原周轉(zhuǎn)數(shù)量)、Phi_Po 、Psi_o 、Phi_Eo、Phi_Do、Phi_pav、ABS/RC(單位反應(yīng)中心的吸收光量子通量)、TRo/RC(單位反應(yīng)中心初始捕獲光量子通量)、ETo/RC(單位反應(yīng)中心初始電子傳遞光量子通量)、DIo/RC(單位反應(yīng)中心能量散失)、ABS/CS(單位樣品截面的吸收光量子通量)、TRo/CSo、RC/CSx(反應(yīng)中心密度)、PIABS(基于吸收光量子通量的“性能”指數(shù)或稱生存指數(shù))、PIcs(基于截面的“性能”指數(shù)或稱生存指數(shù))
  • 紫外LED光源板(選配):365nm或385nm,1)測(cè)量多色熒光(詳見FluorCam多光譜熒光成像系統(tǒng));2)測(cè)量wtGFP(野生型綠色熒光蛋白)、DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚,一種熒光染料)
  • 藍(lán)色LED光源板(選配):470nm,1)測(cè)量EGFP(增強(qiáng)型綠色熒光蛋白);2)用于氣孔功能研究
  • 綠色LED光源板(選配):530nm,測(cè)量YFP(黃色熒光蛋白)
  • *測(cè)量wtGFP、DAPI、EGFP、YFP等熒光蛋白或熒光染料還需要選配相應(yīng)濾波片
  • FluorCam葉綠素?zé)晒獬上穹治鲕浖δ埽壕週ive(實(shí)況測(cè)試)、Protocols(實(shí)驗(yàn)程序選擇定制)、Pre–processing(成像預(yù)處理)、Result(成像分析結(jié)果)等功能菜單
  • 客戶定制實(shí)驗(yàn)程序協(xié)議(protocols):可設(shè)定時(shí)間(如測(cè)量光持續(xù)時(shí)間、光化學(xué)光持續(xù)時(shí)間、測(cè)量時(shí)間等)、光強(qiáng)(如不同光質(zhì)光化學(xué)光強(qiáng)度、飽和光閃強(qiáng)度、調(diào)制測(cè)量光等),具備專用實(shí)驗(yàn)程序語言和腳本,用戶也可利用Protocol菜單中的向?qū)С绦蚰0孀杂蓜?chuàng)建新的實(shí)驗(yàn)程序
  • 自動(dòng)測(cè)量分析功能:可設(shè)置一個(gè)實(shí)驗(yàn)程序(Protocol)自動(dòng)無人值守循環(huán)成像測(cè)量,重復(fù)次數(shù)及間隔時(shí)間客戶自定義,成像測(cè)量數(shù)據(jù)自動(dòng)按時(shí)間日期存入計(jì)算機(jī)(帶時(shí)間戳)
  • 快照(snapshot)模式:通過快照成像模式,可以自由調(diào)節(jié)光強(qiáng)、快門時(shí)間及靈敏度得到清晰突出的植物樣本穩(wěn)態(tài)熒光和瞬時(shí)熒光圖片
  • 成像預(yù)處理:程序軟件可自動(dòng)識(shí)別多個(gè)植物樣品或多個(gè)區(qū)域,也可手動(dòng)選擇區(qū)域(Region of interest,ROI)。手動(dòng)選區(qū)的形狀可以是方形、圓形、任意多邊形或扇形。軟件可自動(dòng)測(cè)量分析每個(gè)樣品和選定區(qū)域的熒光動(dòng)力學(xué)曲線及相應(yīng)參數(shù),樣品或區(qū)域數(shù)量不受限制(>1000)
  • 數(shù)據(jù)分析模式:具備“信號(hào)計(jì)算再平均”模式(算數(shù)平均值)和“信號(hào)平均再計(jì)算”模式,在高信噪比的情況下選用“信號(hào)計(jì)算再平均”模式,在低信噪比的情況下選擇“信號(hào)平均再計(jì)算”模式以過濾掉噪音帶來的誤差
  • 輸出結(jié)果:高時(shí)間解析度熒光動(dòng)態(tài)圖、熒光動(dòng)態(tài)變化視頻、熒光參數(shù)Excel文件、直方圖、不同參數(shù)成像圖、不同ROI的熒光參數(shù)列表等
  • CCD檢測(cè)器帶寬:400–1000nm
  • 給光制度:靜態(tài)或動(dòng)態(tài)
  • Bios:固件可升級(jí)
  • 通訊方式:千兆以太網(wǎng)
  • 尺寸:471 mm(W)×473 mm (D)×512 mm (H)
  • 重量:Appr. 40 kg
  • 電源輸入:Appr. 1100 W
  • 供電電壓:90–240 V

 

 

典型應(yīng)用:

 

上海生命科學(xué)研究院使用FluorCam測(cè)量獲得的GFP成像圖,圖中發(fā)出明亮顏色的植株即為表達(dá)了GFP的植株,其顏色越偏向紅色,則表明表達(dá)的GFP更多

 

鈕扣珊瑚蟲收縮-膨脹不同時(shí)相(T1=0分,T2=30分,T3=60分)NDVI與GFP成像分析(Miguel,2014)

產(chǎn)地:歐洲

 

 

 

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